Zimna pokrzywka, niedobór odporności i autoimmunizacja związana z delecjami PLCG2

Mendelowska analiza zaburzeń regulacji immunologicznej może dostarczyć wglądu w szlaki molekularne związane z obroną gospodarza i tolerancją immunologiczną. Metody
Zidentyfikowaliśmy trzy rodziny z dominująco odziedziczonym kompleksem pokrzywki wywołanej przeziębieniem, niedoborem przeciwciał i podatnością na infekcje i autoimmunizację. Metody immunofenotypowania obejmowały cytometrię przepływową, analizę immunoglobulin w surowicy i autoprzeciwciał, stymulację limfocytów i testy enzymatyczne. Badania genetyczne obejmowały analizę sprzężeń, ukierunkowane sekwencjonowanie Sangera i sekwencjonowanie całego genomu następnej generacji.
Wyniki
Zimna pokrzywka wystąpiła u wszystkich chorych osób. Inne, zmienne objawy obejmowały atopię, ziarniniakową wysypkę, autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, obecność przeciwciał przeciwjądrowych, zakażenia sinopulmonarne i powszechny zmienny niedobór odporności. Poziomy IgM i IgA w surowicy oraz krążących komórek NK i komórek B z klasą pamięci zostały zredukowane. Analiza sprzężeń wykazała siedmiomiesięczny interwał kandydata na chromosomie 16q w jednej rodzinie, pokrywający się o 3,5 Mb haplotypem związanym z chorobą w mniejszej rodzinie. Interwał ten obejmuje PLCG2, kodujący fosfolipazę C?2 (PLC?2), cząsteczkę sygnalizującą wyrażoną w komórkach B, komórkach NK i mastocytach. Sekwencjonowanie komplementarnego DNA ujawniło heterozygotyczne transkrypty pozbawione eksonu 19 w dwóch rodzinach i pozbawione eksonów 20 do 22 w trzeciej rodzinie. Sekwencjonowanie genomowe zidentyfikowało trzy różne delecje w ramce, które ulegały koagregacji z chorobą. Te delecje, zlokalizowane w regionie kodującym domenę auto-hamującą, prowadzą do produktów białkowych o konstytutywnej aktywności fosfolipazy. Komórki wykazujące ekspresję PLCG2 zmniejszyły sygnalizację komórkową w 37 ° C, ale zwiększyły sygnalizację w temperaturach podfizjologicznych.
Wnioski
Delecje genomowe w PLCG2 powodują wzrost funkcji PLC?2, co prowadzi do zaburzeń sygnalizacji w wielu podgrupach leukocytów i fenotypu obejmującego zarówno nadmierną, jak i deficytową funkcję immunologiczną. (Finansowane przez National Institutes of Health Intramural Research Programs i inne).
Wprowadzenie
Sekwencja genetyczna unikalnych fenotypów zapalnych może identyfikować i wyjaśniać szlaki i mechanizmy immunologiczne. Takie badania doprowadziły ostatecznie do odkrycia, którego znaczenie wykracza poza monogeniczne choroby niosące mutacje. Przykłady obejmują rozpoznanie, że FOXP3 ma zasadnicze znaczenie dla różnicowania regulatorowych komórek T u myszy Scurfy oraz u pacjentów z głęboką dysregulacją immunologiczną, 1-4 wykazanie kluczowej roli AIRE w selekcji negatywnej pod względem komórek tłuszczowych komórek T u pacjentów z określonym autoimmunizacją. polyendocrinopathy, 5 oraz identyfikacja NLRP3 jako krytycznego regulatora interleukiny-1 w rodzinach z zapaleniem wywołanym zimnem.6
Pokrzywka indukowana przez zimno jest unikalnym fenotypem zapalnym charakteryzującym się degranulacją komórek tucznych i wyzwalanym przez ekspozycję na zimne bodźce, które mogą doprowadzić do zagrażającej życiu anafilaksji.7,8 Istnieją różne formy zimnej pokrzywki, które różnią się szacunkiem do sposobu dziedziczenia, wieku początkowego i rozdzielczości oraz odpowiedzi na zakres zimnych prowokacyjnych testów.7 Chociaż komórki tuczne wyraźnie wiążą się z patogenezą zimnej pokrzywki, 9 procesy prowadzące do degranulacji takich komórek są słabo zrozumiane . Opisujemy trzy rodziny z zimną pokrzywką, genetyczne przyczyny ich choroby oraz implikacje tych odkryć dla zrozumienia mechanizmów chorobowych.
Metody
Osoby badane
Badani zostali przyjęci do Narodowego Ośrodka Zdrowia w Centrum Klinicznym, gdzie zostali zapisani do protokołów klinicznych zatwierdzonych przez instytucyjną komisję przeglądową Narodowego Instytutu Alergii i Chorób Zakaźnych. Wszystkie podmioty wyraziły pisemną świadomą zgodę.
Analiza genetyczna
Wyizolowaliśmy genomowy DNA z krwi pełnej członków dwóch rodzin i genotypowanych polimorfizmów pojedynczego nukleotydu (SNP). Przeprowadziliśmy parametryczne łączenie wielopunktowe i analizę haplotypów niezależnie w każdej rodzinie, przy użyciu oprogramowania Merlin. 10 Przeprowadziliśmy sekwencjonowanie całego genomu u jednego dotkniętego członka rodziny 1, jak opisano poprzednio.11 Przeanalizowaliśmy egzony kodujące, połączenia splicingowe i komplementarne DNA. (cDNA) PLCG2 dla mutacji za pomocą amplifikacji nakładających się segmentów w reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR), a następnie sekwencjonowania produktów metodą Sangera. Zmapowaliśmy delecje genomowe za pomocą amplifikacji PCR w dalekim zasięgu i sekwencjonowania Sangera. Dodatkowe dane dotyczące testów, odczynników i sekwencji starterów podano w Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie.
Ocena funkcji fosfolipazy C?2
Przebadaliśmy aktywność enzymatycz
[podobne: endometrioza leczenie hormonalne, leczenie niepłodności Warszawa, dermatologa ]
[patrz też: skutki spożywania alkoholu, drenaż limfatyczny poznań, jąkanie toniczne ]