Zimna pokrzywka, niedobór odporności i autoimmunizacja związana z delecjami PLCG2 AD 3

Komórki B charakteryzowały się słabą ekspansją in vitro i zmniejszoną produkcją przeciwciał z klasą przełączaną po stymulacji Staphylococcus aureus Cowan I (SAC) i niemetylowanym nukleotydem zawierającym dinukleotyd cytozynowo-guaninowy (CpG) (Figura 1C i Figura S4 w Dodatkowym Dodatku ). Rekombinacja wtórna w limfocytach B przejściowych CD19 + CD10highIgMhighCD27- była zwiększona, co pokazuje skośność użycia genu łańcucha lekkiego w kierunku elementów końcowych, cecha charakterystyczna, którą obserwuje się także w niedoborze kinazy tyrozynowej Brutona u pacjentów z agammaglobulinemią sprzężoną z chromosomem X, 17a choroba związana z poważnym upośledzeniem sygnalizacji komórek B (rysunek 1D i rysunek S5 w dodatkowym dodatku). W przeciwieństwie do pacjentów z agammaglobulinemią sprzężoną z chromosomem X, którzy mają niewiele komórek B dojrzałych z krwi obwodowej, pacjenci z mutacjami PLCG2 mają istotny dojrzały przedział limfocytów B, co może prowadzić do zwiększonego występowania autoimmunizacji. Analiza sprzężeń i mutacji
Rysunek 2. Rysunek 2. Delecje genomowe w kodowaniu FSG2 fosfolipazy C?2 u badanych. Panel A pokazuje rodowody trzech rodzin z PLAID. Stałe symbole wskazują dotknięte tematy i otwarte symbole niewrażliwych krewnych. Kwadraty wskazują męskich tematów i okrążają kobiety. Ukośniki wskazują zmarłych badanych. Uznany członek rodziny 3 zmarł w wieku roku od zapalenia płuc. Panel B pokazuje przedział kandydujący na długim ramieniu chromosomu 16, zdefiniowany przez przecięcie interwału powiązania w Rodzinie i przedziale kandydującym w Rodzinie 2. Trzy różne delecje PLCG2 zidentyfikowano w trzech rodzinach (czerwone poziomy paski).
Analiza sprzężeń oparta na fenotypie zimnej pokrzywki w Family wykazała pojedynczy interwał połączenia wynoszący 7,7 Mb na chromosomie 16q21 z wynikiem logarytmu prawdopodobieństwa (LOD) wynoszącym 4,2 (fig. 2 i figura S6 w dodatkowym dodatku). Sekwencjonowanie całego genomu jednego dotkniętego członka rodziny nie identyfikuje żadnego nowego kodującego lub miejsca składania pojedynczych nukleotydów, insercji lub delecji w tym przedziale. Interwał sprzężenia został zawężony przez niezależną analizę rodziny 2 (rysunek S7 w dodatkowym dodatku), która zidentyfikowała haplotyp 12,6-Mb, który segregował ze stanem chorobowym i nakładał się na przedział łączący w rodzinie przez 3,5 Mb (Figura 2). Spośród 24 genów zawartych w zwężonym przedziale kandydatów, zidentyfikowaliśmy PLCG2 jako główny gen kandydujący (Tabela S2 w Dodatku Uzupełniającym). Kodowane białko, PLC?2, jest członkiem rodziny fosfolipaz C specyficznych wobec fosfoinozytydu. Członkowie tej rodziny propagują szeroki zakres sygnałów zewnątrzkomórkowych wytwarzając diacyloglicerol (DAG) i 1,4,5-trisfosforan inozytolu (IP3) poprzez hydrolizę fosfolipidu, 4,5-bisfosforanu fosfatydyloinozytolu (PIP2) .18 IP3, który jest produkowany jest odpowiedzialny za uwalnianie wapnia z retikulum endoplazmatycznego, krytycznego zdarzenia w aktywacji komórkowej. Istnieją dwa elementy rodziny PLC?, PLC?1 i PLC?2. Chociaż PLC?1 ulega ekspresji w wielu typach komórek, izoforma PLC?2 reagująca na Rac przeważa i wydaje się, że ma niepotrzebne funkcje w komórkach B19 i naturalnych komórkach zabójczych, 20 z których oba miały anomalie w trzech rodzinach w naszym badaniu.
Bezpośrednie sekwencjonowanie cDNA z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej członków rodziny wykazało transkrypty PLCG2 bez egzonu 19 na jednym allelu, mutację, która była obecna tylko u dotkniętych członków rodziny. Amplifikacja segmentu genomowego PLCG2, który jest oflankowany przez eksony 18 i 20, ujawniła heterozygotyczną delecję, która ulegała koagregacji z zimną pokrzywką (Figura S8 w Dodatku Uzupełniającym). Poprzez bezpośrednie sekwencjonowanie produktów PCR z zachodzących na siebie segmentów flankujących ekson 19, zidentyfikowaliśmy delecję 5,9 kb w PLCG2 (rysunek S8 w Dodatku Aneks).
Stosując to samo podejście, zidentyfikowaliśmy dodatkowe heterozygotyczne delecje PLCG2 w rodzinach 2 i 3 (rysunek S8 w dodatkowym dodatku). W Family 2 zidentyfikowaliśmy transkrypty PLCG2 pozbawione eksonów od 20 do 22, spowodowane delecją 8,2 kb. W Family 3, zidentyfikowaliśmy transkrypty PLCG2, które również nie miały egzonu 19, ale były spowodowane delecją 4,8 kb z punktami przerw różniącymi się od tych znalezionych w rodzinie 1. Te specyficzne dla rodziny delecje nie zostały wykryte u 200 zdrowych osobników pochodzenia północnoeuropejskiego. Analiza post hoc sekwencji całego genomu od członka rodziny potwierdziła delecję 5,9-kb, którą początkowo wykryto w sekwencjonowaniu Sangera (patrz sekcja Metody w dodatkowym dodatku). Proponujemy termin PLAID (związany z PLC?2 niedobór przeciwciał i dysregulację immunologiczną) w celu opisania tej unikalnej konstelacji klinicznych, genetycznych i funkcjonalnych ustaleń.
Badania funkcjonalne zmutowanego PLC?2
Rysunek 3
[patrz też: Stetoskopy dla lekarzy, lekarz dermatologstomatologia katowice, gastrolog rzeszów ]
[patrz też: olx swarzedz, szafraceum, eziclen ]