Przeciwciała w surowicy do kanałów wapniowych typu L u pacjentów z stwardnieniem zanikowym bocznym ad 6

Całkowite poziomy IgG w surowicy u pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym mieściły się w zakresie od 5 do 18 mg na mililitr i nie różniły się istotnie od poziomów u pacjentów z chorobami autoimmunologicznymi. Gdy przeprowadzono testy ELISA, które testowały stałe stężenia IgG w surowicy, wyniki były równie czułe i selektywne. Reaktywność VGCC typu L z oczyszczoną IgG pacjenta
Figura 3. Figura 3. Porównanie ilościowe wiązania IgG z VGCC typu L z mięśnia szkieletowego. Oczyszczone IgG (5 .g na 100 .l) dodano do studzienek do mikromiareczkowania wstępnie traktowanych albo częściowo oczyszczonymi (Panel A), albo wysoce oczyszczonymi (Panel B) VGCC typu L z mięśni szkieletowych. Każdy punkt reprezentuje średnie wartości odczytów gęstości optycznej (jak wyjaśniono w legendzie dla Figury 2), zmierzonych w trzech egzemplarzach w dwóch eksperymentach po 3-godzinnej inkubacji w 37 ° C (Panel A) lub 3-godzinnej inkubacji w 37 ° C, a następnie 15 godzin inkubacji w 25 ° C (panel B). Paski przedstawiają wartości mediany. Stałe trójkąty przedstawiają wartości dla pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym (ALS), wartościami otwartych trójkątów dla pacjentów z zespołem Lamberta-Eatona (LES), wartościami dla krążących pacjentów z chorobą neurologiczną i wartościami otwartego koła dla normalnych kontroli.
IgG zachowywało się podobnie jak frakcje w surowicy, gdy izolowano IgG izolowane z podobnych populacji pacjentów przy równych stężeniach białka na płytki ELISA poddane wstępnej obróbce, częściowo oczyszczonej (stężenie w płytce, 4 fmol na studzienkę do mikromiareczkowania) lub wysoce oczyszczonej (stężenie w płytce, 20 fmoli na studzienkę do mikromiareczkowania) VGCC typu L. IgG od pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym wiąże się z częściowo oczyszczonym antygenem VGCC, różnicując ich działanie od działania większości pacjentów z chorobą neurologiczną (p <0,02 w teście sumy rang Wilcoxona) (ryc. 3A). Frakcje IgG od dwóch pacjentów z zespołem Lamberta-Eatona również silnie reagowały w tym teście. Różnice w odpowiedziach IgG różnych grup pacjentów były bardziej widoczne, gdy wysoce oczyszczone VGCC typu L były stosowane jako antygeny (wynik dla dwóch próbek Wilcoxon z, 3,97, P <0,001) (Fig. 3B). IgG od pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym nie reagowało specyficznie z białkami cytoszkieletu, białkami cytozolowymi, gangliozydami GM1 lub różnymi oczyszczonymi białkami błonowymi mięśni, w tym z limfocytową ATPazą, kalcynestryną i receptorem rianodynowym.
Na takie wiązanie nie wpływały jakościowo metody oczyszczania VGCC ani laboratorium, w którym zostało ono przygotowane. IgG od poszczególnych pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym wykazywał ilościowo podobny poziom reaktywności i jakościowo podobnych uporządkowanych rangowo odpowiedzi, gdy testowano je przeciwko VGCC typu L przygotowanemu w podobny sposób przez dwa laboratoria i jakościowo podobne odpowiedzi uporządkowane według rang (choć ilościowo zmniejszone wartości) gdy testowano go na VGCC typu L o wyższej czystości, wyprodukowanego w trzecim laboratorium. Te ilościowe redukcje wiązania po dalszym oczyszczaniu antygenu można wyjaśnić przez usunięcie zanieczyszczających białek, z którymi reagują inne immunoglobuliny, zwiększając swoistość. Ponieważ występowały ilościowe różnice w wiązaniu w teście ELISA zarówno przeciwciał monoklonalnych, jak i IgG pacjenta w niektórych preparatach VGCC typu L przy braku zmian w podjednostkowych ruchliwościach elektroforetycznych na żelu denaturującym, struktury drugorzędowe, trzeciorzędowe lub czwartorzędowe VGCC typu L mogą również są ważne dla interakcji przeciwciało-antygen i mogą się różnić między preparatami.
Szybkość reakcji w teście ELISA była znacznie wolniejsza w przypadku IgG od pacjentów ze stwardnieniem zanikowym bocznym i zespołem Lamberta-Eatona niż w przypadku monoklonalnych przeciwciał specyficznych dla podjednostek (czas reakcji kilku godzin w porównaniu z jednym z 10 do 15 minut), gdy badano go pod kątem częściowego oczyszczenia. VGCC typu L
[hasła pokrewne: ośrodek psychoterapii warszawa, laserowe usuwanie blizn warszawa, eziclen ]