ERCC1 i niedrobnokomórkowy rak płuc

Zheng i in. (Wydanie 22 lutego) konkludują, że wycięcie naprawy białka grupy (ERCC1) z wycięciem naprawy jest wyznacznikiem przeżycia po chirurgicznym leczeniu niedrobnokomórkowego raka płuca we wczesnym stadium. Białko ERCC1 łączy się z białkiem F (XPF) Xeroderma pigmentosum, tworząc nukleazę, która działa w naprawie DNA.2 Zaproponowano poziom białka ERCC1 jako przydatnego prognostyka odpowiedzi na chemioterapię opartą na cisplatynie i wynik kliniczny, 3 na podstawie immunohistochemicznego barwienia guzów przy użyciu przeciwciała monoklonalnego 8F1. Zgodnie z naszą wiedzą nie odnotowano jednak żadnych kontrolowanych eksperymentów wykazujących swoistość tego przeciwciała.
Figura 1. Figura 1. Porównanie przeciwciał anty-ERCC1 8F1 i FL-297 do wykrywania ERCC1. Panele A, B i C pokazują immunoblotting ekstraktów (50 .g białka) od Pacjenta C5RO (prawidłowe fibroblasty), Pacjenta XP2YO (xeroderma pigmentosum z mutacją w XPF) i Pacjenta 165TOR (mutacja w ERCC1). Znaczniki masy cząsteczkowej są pokazane po lewej stronie każdego panelu. W przypadku FL-297, ERCC1 (39 kD) można zobaczyć w normalnych fibroblastach, ale jest ledwo widoczny w komórkach z XP2YO i 165TOR (panel A). Przeciwciało 8F1 rozpoznaje dwa białka w ekstraktach komórkowych (panel B). Bardziej znaczące białko (wskazane przez znak zapytania) w komórkach ERCC1-dodatnich iw komórkach, które są pozbawione ERCC1 migruje wolniej niż ERCC1 i rekombinowany znakowany histydyną ERCC1 (HIS-ERCC1). Panel C wykazuje barwienie immunologiczne za pomocą przeciwciała tubuliny. Immunobarwienie FL-297 (1: 100) mieszaniny komórek od pacjenta C5RO (znakowanego kulkami 3 .m) i od pacjenta XP2YO (znakowanego kulkami 0,6 .m) ujawnia wybarwienie jądrowe normalnych komórek, ale tylko zabarwienie tła XP2YO (Panel D, również pokazujący wybarwienie dichlorowodorku 4., 6-diamidino-2-fenyloindolu [DAPI]), podczas gdy 8F1 (1: 500) intensywnie wybarwia jądra komórek ERCC1-dodatnich i pozbawionych ERCC1. Znakowanie koimmunologicznym z przeciwciałem dimeru antymyminy i FL-297 fibroblastów napromieniowanych światłem ultrafioletowym (UV) pokazuje, że ERCC1 kolokalizuje z uszkodzeniem DNA indukowanym przez UV (Panel E). Przeciwnie, antygen rozpoznawany przez 8F1 nie kolokalizuje z wywołanym przez UV uszkodzeniem DNA (panel F) lub ERCC1 (panel G).
Przeanalizowaliśmy 8F1 i drugie komercyjnie dostępne przeciwciało (FL-297) pod względem swoistości w wykrywaniu ERCC1, przy użyciu prawidłowych ludzkich fibroblastów pozytywnych dla ERCC1 i komórek od pacjentów z odziedziczonymi mutacjami w ERCC1 (Pacjent 165TOR) i XPF (Pacjent XP2YO) powodując niedobór Nukleaza ERCC1-XPF.2,4 Immunoblot lizatów komórkowych z FL-297 ujawnił pojedyncze pasmo o odpowiedniej masie cząsteczkowej w prawidłowych fibroblastach i potwierdził, że poziom białka ERCC1 był obniżony w komórkach od Pacjentów XP2YO i 165TOR (Figura 1A). Przeciwciało 8F1 wykryło ERCC1 i co najmniej jedno inne białko w ekstraktach z całych komórek (Figura 1B). Przeciwciało tubuliny potwierdziło równe ładowanie ekstraktów komórkowych (Figura 1C). Reagujące krzyżowo białko występuje w prawidłowych ekstraktach komórkowych z niedoborem ERCC1.
Komórki pozbawione ERCC1 z Pacjenta XP2YO i normalnych ludzkich fibroblastów były różnie znakowane paciorkami cytoplazmatycznymi i hodowane wspólnie Immunobarwienie FL-297 rozróżnia komórki ERCC1-pozytywne i pozbawione ERCC1 (Figura 1D). Przeciwnie, 8F1 silnie zabarwił jądra wszystkich komórek. Napromienianie komórek światłem ultrafioletowym (UV) przez filtr zawierający pory 8 .m powoduje subnuklearne domeny wywołane przez UV uszkodzenia DNA, które można zidentyfikować za pomocą przeciwciała rozpoznającego dimery tyminy. 5. Nukleaza naprawcza ERCC1-XPF gromadzi się w tych miejscach uszkodzeń DNA .5 Immunobarwienie napromienionych fibroblastów dimerem antymyminy i FL-297 dało sygnały kolokalizujące (rysunek 1E). Przeciwnie, antygen rozpoznawany przez 8F1 nie gromadzi się preferencyjnie w miejscach uszkodzenia DNA (Figura 1F) lub daje sygnał, który kolokalizuje z FL-297 (Figura 1G).
Te eksperymenty pokazują, że ERCC1 nie jest głównym antygenem rozpoznawanym przez przeciwciało 8F1 w immunobarwieniu ludzkich komórek. Ponadto 8F1 nie rozróżnia zarodków pozbawionych ERCC1 i ERCC1. Tożsamość antygenu rozpoznawanego przez 8F1 i powód, dla którego 8F1 barwi niektóre guzy silniej niż inne, są nieznane. Wyniki te podkreślają, że nawet monoklonalne przeciwciała wytworzone przeciwko rekombinowanemu białku nie są pewne.
Laura J. Niedernhofer, MD, Ph.D.
Nikhil Bhagwat, MB, BS
Richard D. Wood, Ph.D.
University of Pittsburgh, Pittsburgh, PA 15213
Wsparcie badań nad przeciwciałami 8F1 uzyskano dzięki grantowi przyznanemu na University of Pittsburgh Cancer Institute ze Specjalistycznych Programów Płuc w zakresie Doskonałości Badań Narodowego Instytutu Zdrowia. Przeciwciało 8F1 jest dostępne do komercyjnego licencjonowania z sekcji transferu technologii Cancer Research UK, Cancer Research Technology. Dr Wood otrzymuje część przychodów uzyskanych z takich licencji w ramach programu Nagrody dla twórców. Nie zgłoszono żadnego innego potencjalnego konfliktu interesów związanego z tym pismem.
5 Referencje1. Zheng Z, Chen T, Li X, Haura E, Sharma A, Bepler G. Synteza DNA i naprawy genów RRM1 i ERCC1 w raku płuc. N Engl J Med 2007; 356: 800-808
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Sijbers AM, de Laat WL, Ariza RR, i in. Xeroderma pigmentosum grupa F spowodowana defektem endonukleazy naprawy DNA specyficznej dla struktury. Cell 1996; 86: 811-822
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
3. Olaussen KA, Dunant A, Fouret P, i in. Naprawa DNA przez ERCC1 w niedrobnokomórkowym raku płuca i chemioterapii adiuwantowej opartej na cisplatynie. N Engl J Med 2006; 355: 983-991
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
4. Jaspers NG, Raams A, Silengo MC, i in. Pierwszy zgłaszany pacjent z ludzkim niedoborem ERCC1 ma zespół mózgowo-okulno-facio-szkieletowy z łagodnym defektem naprawy naprawy nukleotydów i poważną niewydolnością rozwojową. Am J Hum Genet 2007; 80: 457-466
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
5. Volker M, Mone MJ, Karmakar P. i in. Sekwencyjne zestawianie czynników naprawy wycinków nukleotydów in vivo. Mol Celi 2001, 8: 213-224
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
Zheng i in. wydaje się, że uproszczono powiązanie podjednostki regulatorowej reduktazy rybonukleotydowej (RRM1) i poziomu ekspresji ERCC1 z rokowaniem w niedrobnokomórkowym raku płuc Autorzy nie rozwarstwiali swoich pacjentów pod względem palenia tytoniu i innych potencjalnych kowariancji oraz analizy genotypowej RRM1 i ERCC1. Dotychczas odnotowano 226 i 92 polimorfizmy pojedynczego nukleotydu (SNP) odpowiednio w RRM1 i ERCC1, a wiele z tych SNP ma efekt funkcjonalny (szczegóły są dostępne na stronie www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/) . Na przykład SNP w RRM
[przypisy: ośrodek psychoterapii warszawa, tarczyca u mężczyzn objawy, olx olesno ]