Całkowity niedobór inhibitora plazminogenu typu aktywatora 1 z powodu mutacji z przesunięciem ramki ad 5

Jako kontrole analizowano podobnie otrzymane lizaty E. coli transformowane wektorem pET3A. Rozmiar rekombinowanego PAI-1 typu dzikiego wynosi około 43 kD; obserwowana wielkość rekombinowanego zmutowanego PAI-1 jest zgodna z wielkością (29 kd) przewidywaną na podstawie lokalizacji wstawki dinukleotydowej w sekwencji kodującej PAI-1.
Aby scharakteryzować dalej zmutowane białko PAI-1, dinukleotyd TA wstawiono do dojrzałego cDNA PA1-1 do nukleotydu 700 przez ukierunkowaną mutagenezę, a powstały rekombinowany PAI-1 eksprymowano w E. coli (Fig. 4). . Nie było wykrywalnej aktywności hamującej aktywator plazminogenu typu urokinazy w surowych lizatach ekspresji zmutowanego PAI-1 z E. coli, podczas gdy PAI-1 eksprymujący E. coli wykazał silną aktywność (26000 U na mililitr zawiesiny komórek bakteryjnych). Elektroforeza w żelu sodowym z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem i analiza metodą Western blot lizatów komórek bakteryjnych ujawniła białko immunoreaktywne o masie około 29 kd, masę zgodną z tą przewidzianą dla produktu zmutowanego białka. Jednak zmutowane białko było nierozpuszczalne i najwyraźniej niestabilne w E. coli.
Dyskusja
Chociaż PAI-1 uważany jest za krytyczny regulator aktywacji plazminogenu, brakowało silnego związku pomiędzy wadliwą ekspresją tego czynnika a chorobą człowieka. Ten raport całkowitego niedoboru PAI-1 u dziecka bez żadnej widocznej przyczyny nieprawidłowego krwawienia świadczy o istotnej roli PAI-1 w prawidłowej hemostazie. Oczekuje się, że zwiększone wytwarzanie plazmin z powodu wadliwego hamowania aktywatorów plazminogenu spowoduje przedwczesną lizę zatyczek hemostatycznych, a zatem nieprawidłowe krwawienie. Warto zauważyć, że probanda przeszedł operację ustną bez powikłań krwotocznych po otrzymaniu kwasu traneksamowego, inhibitora plazminy.
Mechanizm leżący u podłoża tego deficytu PAI-1 jest homozygotyczną mutacją przesunięcia ramki w obrębie genu PAI-1, która powoduje tworzenie przedwczesnego kodonu stop. Produkt mRNA tego nieprawidłowego genu wydaje się być niestabilny in vivo, jak zaobserwowano w przypadku mutacji, które powodują przedwczesne kodony stop w innych genach.25 Ponadto analiza rekombinowanego białka PAI-1 eksprymowanego w E. coli sugeruje, że ta mutacja powoduje w syntezie nierozpuszczalnego, niestabilnego białka. Podobny wpływ na stabilność białek w komórkach eukariotycznych zaobserwowano w odpowiedzi na delecje C-terminalne w innym serpinie, inhibitorze .1-proteinazy. [26]
Tło Amisha z probanda sugeruje powszechne genetyczne pochodzenie zmutowanych alleli rodzicielskich. Genealogiczne zapiski potwierdziły, że pradziadek probanda był także jej pradziadkiem ze strony matki. Ponad 200 członków tej rodziny jest potomkami tego wspólnego przodka. Zatem w tej populacji można zidentyfikować inne z niedoborem PAI-1, a także nosicielami heterozygotycznymi. We wstępnym badaniu przesiewowym 11 osób 2 osoby heterozygotyczne z powodu niedoboru PAI-1 zostały zidentyfikowane wśród Starszego Zakonu Amiszów, którzy nie są bezpośrednimi potomkami wyżej wspomnianego wspólnego przodka. Chociaż poziomy PAI-1 w osoczu różnią się znacznie w normalnej populacji, w tej rodzinie genotypy dobrze korelują z poziomami w osoczu PAI-1: członkowie heterozygotyczni mają poziomy pośrednie, a homozygotyczni normalni członkowie mają najwyższe poziomy (Fig.
[patrz też: liraglutyd, półpasiec objawy zdjęcia, jak wygląda półpasiec ]